调控珠子参皂苷生物合成PjFPS/β-AS关键酶基因的克隆与功能研究
珠子参为五加科人参属植物,在我国有悠久的药用历史,以其根茎入药。珠子参药材主要分布于云贵、四川、陕西等地,具有抗炎、祛瘀止痛、抗肿瘤、止血、抗氧化等功效。
珠子参皂苷是珠子参的主要活性成分,由达玛烷型和齐墩果烷型三萜皂苷组成。目前,珠子参药材多为野生品,其生长周期长,一般生长6-7年方能入药,供需矛盾突出。
有必要利用现代分子生物学及基因工程技术研究珠子参皂苷的生物合成途径,进而开展珠子参皂苷的合成生物学研究。本研究首先利用异硫氰酸胍法提取了珠子参愈伤组织的总RNA,并将其反转录形成了cDNA,并以此cDNA为模板,通过同源克隆的方法成功获得PjFPS基因的全长序列（KP684141）,对该序列进行生物信息学分析,构建了pGEM-T-Pj FPS克隆载体和植物过表达载体pCMBIA1300s-Pj FPS。
通过根癌农杆菌转化法将Pj FPS转化到野生型珠子参细胞中,获得阳性转基因细胞;依据同样的方法又将Pj FPS转化到过表达β-AS基因的珠子参细胞中,并成功获得阳性转基因细胞。通过实时荧光定量PCR、比色法及皂化 ...