尼古丁对阿尔兹海默症中APP代谢影响及其作用机制研究
目的研究报道尼古丁可以作用于特定的乙酰胆碱受体,不仅可以减少Aβ的产生,并且可以增加具有神经保护作用的分泌型的s APPα,因而为治疗AD提供一个方向,但是目前其作用机制尚不明确。本研究通过体外实验研究尼古丁对APP代谢的影响及其作用机制。
方法APP被β分泌酶BACE1切割产生sAPPβ和C99或C89,C99和C89再被γ分泌酶的主要亚型PS1切割产生Aβ40和Aβ42,还有是APPα分泌酶ADAM10切割产生分泌型的sAPPα和C83,C83再被γ分泌酶的主要亚型PS1切割产生片段P3。1.采用浓度梯度的尼古丁(0M、10-7M、10-6M、10-5M、10-4M、10-3M)处理干预细胞6hr,用Western blotting检测APP及其产物C83蛋白的表达水平。
并检测APP主要的切割酶ADAM10、BACE1、PS1的变化。2.分成一个对照组和尼古丁处理组,western blot检测胞内和膜上磷酸化的PKC和RACK1的变化。
3.用PKC的抑制剂提前30min干预细胞,再用尼古丁处理6hr,western blo ...