尼古丁对血管内皮细胞自噬作用机制的研究
目的:吸烟作为心血管损伤的独立危险因素严重危害人体健康。本实验通过体外研究尼古丁对血管内皮细胞的影响而模拟在体吸烟对心血管损伤的模型,进而探讨尼古丁引起血管内皮细胞的损伤机制,通过明确尼古丁对自噬流及凋亡的影响进而揭示尼古丁与血管内皮细胞功能紊乱之间的关系。
方法:用尼古丁干预体外培养的人脐静脉内皮细胞,模拟在体吸烟模型。1.检测尼古丁对血管内皮细胞凋亡和自噬的影响,将HUVECs随机分组:空白对照组、尼古丁组(6×10<sup>-6</sup> M)/氯喹组（CQ）和氯喹与尼古丁组（CQ+NIC）,采用蛋白免疫印迹法（Western Blot）检测凋亡相关蛋白cleaved caspase-9、cleaved caspase-8、cleaved caspase-3及自噬小体标志物LC3Ⅱ和自噬相关蛋白Beclin-1、SQSTM1/p62、LAMP2的蛋白表达水平;采用流式细胞术检测血管内皮细胞凋亡率。
2.检测尼古丁抑制自噬的信号通路,将HUVECs随机分为五组:空白对照组、尼古丁组（15 min、30 min、60 min）、α7nAChR ...