贝伐单抗通过激活自噬对脑胶质瘤细胞化疗耐药的影响
目的:探讨贝伐单抗对脑胶质瘤细胞的抑制作用以及脑胶质瘤细胞对贝伐单抗产生耐药性的发生机制。方法:体外培养脑胶质瘤细胞(U87-MG细胞系)。
①使用不同浓度的贝伐单抗来处理U87-MG细胞,处理时间持续24小时或者48小时,随后使用MTT试剂盒检测不同浓度贝伐单处理条件下U87-MG细胞的存活率,用以检验贝伐单抗对脑胶质瘤细胞的直接抑制效应;②使用不同浓度的贝伐单抗处理U87-MG细胞48小时,使用Annexin V-FITC/PI试剂盒及流式细胞仪检测细胞凋亡情况,用以检验贝伐单抗对脑胶质瘤细胞的促凋亡效果;③使用不同浓度的贝伐单抗处理脑胶质瘤细胞48小时后,直接裂解细胞并进行Western Blot检测自噬过程中标志性蛋白:LC3B-I、LC3B-II和SQSTMI(p62)表达水平变化,以及LC3B-II/LC3B-I比例变化,用以验证贝伐单抗是否诱导脑胶质瘤细胞产生自噬;④U87-MG细胞在不同浓度贝伐单抗的存在的的情况下培养48小时,裂解细胞,处理样品和总蛋白定量后,进行丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot检测。使用靶向 ...