浸矿微生物氧化亚铁硫杆菌抗氟基因工程菌的构建
背景与目的:氧化亚铁硫杆菌(Thiobacillus ferrooxidans,T.f)是1947年分离出来的新菌种,这是一种专性自养及极端嗜酸性的硫杆菌,它广泛分布在土壤、海水、硫磺泉以及沉积泉中,广泛应用于低品位铜矿、铀矿以及其他多种贵金属的浸出和回收,它是目前生物冶金中研究最多、最有经济效益的浸矿微生物。但是,由于该菌生长缓慢、细胞得率低,而且对铀、氟等一些离子缺乏抗性,所以在实际应用中限制了其应用范围,同时也对研究工作带来很多不便。
本实验通过分子生物学技术,克隆抗氟基因flr-4,将其导入T.f1中,以期获得稳定遗传的抗氟基因工程菌。方法:1.应用RT-PCR技术,从秀丽隐杆线虫中克隆抗氟基因(flr-4),构建pET30a-flr-4原核表达载体,将其导入大肠杆菌BL21(DE3)中,利用SDS-PAGE及Western blot检测Flr-4蛋白的表达,通过生长动力学曲线,检测大肠杆菌抗氟能力的变化。
2.构建pJRD215-flr-4载体,将其导入大肠杆菌SM10后,利用接合转移技术,将载体导入T.f1,检测pJRD215- ...