丙泊酚对原代培养胎鼠大脑神经元缺氧损害保护作用的研究
目的 通过原代培养胎鼠大脑神经细胞研究神经元缺氧后神经细胞活力和NO(一氧化氮)产量的变化及丙泊酚预处理和丙泊酚后处理对缺氧胎鼠神经元神经细胞活力和NO产量的影响,同时研究在正常培养条件下,不同浓度丙泊酚作用不同时间后鼠脑神经元中Hsp70(热休克蛋白70,诱导型)、Hsp70mRNA和Hsc70mRNA(热休克同源蛋白70,结构型)的表达,从细胞水平上阐明丙泊酚脑保护作用机制,为临床上运用丙泊酚脑保护作用时合理地选取丙泊酚的给药时机和给药浓度提供理论依据。 方法 取胎龄为16~18天的胎鼠大脑神经元进行原代分离培养,应用倒置相差显微镜进行细胞形态学观察,MTT法(改良四甲基偶氮唑盐光吸收检测法)进行细胞酶学分析,硝酸还原酶法测定细胞内NO的产量,免疫组化法观察Hsp70的表达,原位杂交法观察Hsp70mRNA及Hsc70mRNA的表达。
实验分为五部分:1.研究在正常培养条件下不同浓度丙泊酚对原代培养胎鼠神经元神经细胞活力的影响。培养12天的胎鼠大脑神经元随机分为两组:①正常对照组;②实验组:选取5个丙泊酚浓度(1.4,5.6,1 ...
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