小麦条锈菌全基因组测序文库构建和原生质体制备研究
小麦条锈病是一种全球传播的流行性真菌性病害。小麦条锈病菌全基因组测序有助于更全面、深入认识其生理特点和致病机理,对预防和控制病害的发生和流行起着非常重要的作用。
全基因组测序项目以条中32号生理小种为材料,采用全基因组鸟枪法Solexa测序结合Fosmid质粒两端Sanger法测序相结合的综合策略。本课题为整个测序项目的基础部分,主要完成了以下5方面的工作:1.完成了测序小种单孢菌系的分离纯化。
采用传统生理小种鉴定方法,对单孢分离系进行了毒性鉴定,经鉴定的CYR32单孢菌系经扩繁后用于测序DNA提取。2.大片段DNA的提取和Fosmid基因组文库构建。
以夏孢子萌发芽管为材料,采用改进方法成功获得大片段DNA,脉冲电泳检查片段主带大小在35-48 kb,回收大片段DNA,构建Fosmid质粒文库。文库含有20,000个克隆,重组率为96.88%;插入片段长度平均为35 kb,对培养第一天和第六天的文库克隆进行比较检测结果表明,文库稳定性高,培养过程中没有发生变化。
3.高质量DNA提取和Solexa PE文库构建。以夏孢子为材料提取D ...