小鼠TET3蛋白入核信号的鉴定及其出核机制初探
基因激活与DNA去甲基化相关。TET家族蛋白能够通过甲基氧化作用介导DNA去甲基化。
小鼠TET3蛋白是由1668个氨基酸组成的DNA甲基氧化酶,其在胞质内翻译和修饰,在核内发挥甲基氧化功能。TET3蛋白分子量大,难以被动扩散入核,所以,TET3可能存在一个或多个入核信号(NLS)。
本文采用生物信息学手段在TET3蛋白预测到五个常规NLS,并对这些NLS进行了功能和唯一性验证。(1)本论文构建了一系列截短TET3片段与EGFP融合蛋白表达载体,载体导入细胞系后观察这些融合蛋白的核定位情况,结果发现,TET3的NLS大概位置在1310-1668之间；进一步的突变实验证明TET3蛋白的KKRK序列具有核定位功能,并且序列比对发现,KKRK序列在NCBI公布的所有物种TET3蛋白中保守。
(2)融合蛋白表达载体转染细胞试验发现,在胞质蛋白EGFP-GH和EGFP-GST后面连接含有KKRK的TET3片段,均导致了这些胞质蛋白的入核；甚至单独的KKRK连接到这些胞质蛋白,也导致了它们的入核,而将去除KKRK的TET3片段连接在胞质蛋白后面,则不 ...