粟酒裂殖酵母必需基因省略抑制子的系统筛选和机制研究
在单细胞物种中,必需基因可被简单定义为在正常培养条件下对细胞生长所必需的基因。因此必需基因常控制细胞内核心的生物学过程,也在不同物种间具有很高的保守性[1]。
功能基因组学的研究表明,有些基因在不同的物种间显示出不同的必需性[2],这表明基因的必需性受遗传环境影响。遗传学实验还曾发现某些必需基因缺失造成的致死表型可以被单个突变所挽救,这种突变被称为省略抑制子。
为系统研究省略抑制现象,我们在粟酒裂殖酵母S. pombe中对其TT号染色体左臂的165个必需基因开展了省略抑制子筛选。在本课题中,我们通过覆盖几乎整个基因组的过表达质粒文库观察单个基因的过表达对必需基因缺失的弥补性影响。
我们首先在S. pombe中建立了一套可靠的筛选过表达省略抑制子(overexpression-mediated bypass-of-essential-gene (0-BOE) suppressors)的方法,并成功对128个必需基因进行了O-BOE的筛选以及鉴定。通过我们的实验结果,我们发现在S. pombe的基因组中,约12.5%的必需基因缺失的致死表 ...