猪圆环病毒2型cap蛋白B细胞线性抗原表位鉴定
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摘要：
    研究报道，Cap蛋白由233-235个氨基酸组成，其中包含多个线性和构象抗原表位，本研究基于目前的研究报道对Cap蛋白的抗原表位进行鉴定和分析。首先构建重组载体pET Cap，利用原核表达系统表达Cap蛋白。对己经表达的Cap蛋白与之前实验室己有的酵母Cap蛋白进行反应原性比较，酵母表达的Cap蛋白要好于原核表达的Cap蛋白。用酵母表达的Cap蛋白作为抗原对BALB/c雌鼠进行免疫制备单克隆抗体获得3株杂交瘤细胞株，命名为1E7, 4E2, 5D1，其中1E7和4E2可分泌抗Cap蛋白的单克隆抗体，5D1可分泌抗His标签的单克隆抗体。 其次，本研究对Cap蛋白进行截短表达，去除Cap蛋白的核定位信号后，设计引物构建载体表达19个短肽，命名为JD1--JD19。利用短肽扫描法，将短肽与单克隆抗体反应，初步鉴定出两个线性抗原表位;再利用该方法对已经鉴定的表位进行进一步的截短，最后确定两株单克隆抗体所识别的精确表位分别为77NDFLPPG83和’138YDPYVNY144。在已经定的表位当中77N ...