丙泊酚抑制过氧化氢所致的脊髓星形胶质细胞的损伤
第一部分成年大鼠脊髓星形胶质细胞的培养目的：研究成年大鼠脊髓星形胶质细胞(astrocytes, AS)的体外培养、分离和纯化的方法。为进一步研究星形胶质细胞的生物学特性和脊髓损伤(spinal cord injury, SCI)提供实验模型。
方法：采用原代培养和传代培养成年大鼠脊髓星形胶质细胞。无菌条件下取出成年大鼠胸段的脊髓,将脊髓剪碎用胰酶二次消化法,与机械吹打相结合使细胞分散,制成单细胞悬液,接种于无底物粘附的培养瓶中,置于37℃,5%CO2细胞培养箱中。
利用差速黏附处理以去除成纤维细胞成分。培养10-14天,待细胞融合达90%左右时利用摇床纯化细胞,舍弃含脱落细胞(小胶质细胞、少突胶质细胞及神经元)的细胞悬液,接着培养,待细胞长满培养瓶底时传代,观察传代细胞形态并对传代后的星形胶质细胞行免疫荧光鉴定。
结果：运用差速粘附法、恒温震荡及传代获得了较高纯度、形态典型的脊髓源性星形胶质细胞。免疫细胞化学染色显示：波形蛋白(vimentin)染色为阳性,阳性染色细胞高达100%,但胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary  ...