体外培养星形胶质细胞α7尼古丁型乙酰胆碱能受体调控β-淀粉样蛋白聚集的作用
目的:研究激活星形胶质细胞内的α7尼古丁乙酰胆碱能受体(nicotinic acetylcholine receptor,nAChR)后对调控β-淀粉样蛋白(β-amyloid peptide,Aβ)聚集的作用。方法:分离新生大鼠大脑皮质,培养原代星形胶质细胞并纯化、传代,使用细胞免疫荧光的方法鉴定细胞及纯度;体外制备Aβ寡聚体;将培养细胞分为对照组、激动剂组、拮抗剂+激动剂组以及Aβ组、激动剂+Aβ组、拮抗剂+激动剂+Aβ组。
激动剂有尼古丁、PNU、s24795,拮抗剂为甲基牛扁亭(methyllycaconitine,MLA)。用蛋白印迹法(Western blotting)和逆转录PCR(reverse transcription,PCR)法检测正常星形胶质细胞内nAChR不同亚单位的表达;蛋白印迹法和凝胶银染方法鉴定Aβ寡聚体聚集情况;用CCK-8方法测定星形胶质细胞的存活率;使用蛋白印迹法检测加入激动剂后α7 nAChR的表达以及Aβ蛋白是否降解。
结果:采用免疫荧光法鉴定所培养的细胞,结果显示星形 ...