屋尘螨过敏原转染树突状细胞诱导哮喘小鼠免疫耐受的研究
目的:“Th1/Th2偏移”假说是哮喘发病的主要免疫学机制,但近年的研究发现该学说不能完全解释哮喘的免疫学机制异常,提出了哮喘是一种对过敏原免疫耐受缺陷的疾患,其中树突状细胞(DCs)可能是关键的调节因素之一。本实验拟构建尘螨主要变应原基因转染的DCs,研究基因屋尘螨转染DCs诱导哮喘小鼠对致敏抗原的免疫耐受作用和机制。
研究内容:1、分离小鼠骨髓后体外培养扩增DCs。2、将屋尘螨主要过敏原Der p1、Der p2真核表达质粒转染DCs,构建过敏原转染DCs,观察过敏原基因转染对DCs表面分子和炎性介质分泌的影响;3、建立屋尘螨提取液致敏/激发小鼠的肺部变应性炎性模型。
4、观察屋尘螨过敏原转染DCs对小鼠脾脏淋巴细胞中调节性T细胞及肺泡灌洗液中细胞因子、肺组织病理变化的影响。5、观察清除调节性T细胞对屋尘螨转染DCs作用的影响方法:1、分离小鼠骨髓细胞,在含GM-CSF的完全培养基进行培养。
以流式细胞仪鉴定培养细胞表面分子CD8α、CD11c、MHC II分子。2、将携带有屋尘螨主要过敏原Der p1、Der p2的pDs-D ...