大豆子叶节再生体系遗传转化流程
1材料1.1大豆品种：
william82
沈农9号华春3号华春6号天隆1号Jack
等1.2菌种和质粒：质粒由实验室构建保存，多为
Bar基因筛选，常用根癌农杆菌为
EHA101, EHA105
等，甘油管
分装-80℃保存1.3培养基：培养根癌农杆菌用
YEB培养基，大豆组培用培养基为
MS培养基的无机盐加上
B5培养基的维生素
（具体成分不详）
2方法2.1农杆菌的培养及制备
：取50~100ul
甘油管保存的菌液接种于
5ml含抗生素的
YEP液体培养基中，
28℃摇床培养过夜（活化菌体）。第二天取该菌液
30~50ul
均匀涂布于添加了抗生素的
YEP固体培养基上，
28℃培养2天。2天后用小勺刮取
YEP固体培养基上的菌体重悬于侵染液中（侵染液：共培养液体培养基
CCM+
乙酰丁香酮
+表面活性剂
silwetl-77
，乙酰丁香酮使用浓度为0.0392
g/L，使用DMSO
溶解，现用现配
；表面活性剂：侵染液
=1:1000
），OD600调整为0.5~0.8
。2.2外植体制备
：选取种皮光滑无病斑、无裂纹、无霉菌的成熟大豆种子，将成熟 ...