SPI-PON 812
常规电镜制样流程
实验前准备
:青霉素瓶、枪头、移液枪、量筒、注射器、吸管、滤纸、
牙签、包埋模具、烧杯、废液缸、玻璃棒(
除一次性耗材外,均需严格洗涤干净,烘干后备用)。
实验步骤
(包埋前步骤均在
4°C冰箱中进行)
:A.取材及固定:用锋利刀片将样品切成
1 mm
3的小块,取材后尽快放入预冷的戊二醛固定液中,抽真空后,换新鲜的固定液于
4°C冰箱中固定
24 h
(根据材料不同,固定时间不一致)。
B.漂洗:用0.1M的PB缓冲液漂洗三次,每次
30 min
。C.后固定:用
1%四氧化锇,于
4°C冰箱后固定
4h(根据材料不同,固定时间不一致)。
D.漂洗:用
0.1M的PB(pH=7.2)缓冲液漂洗三次,每次
20 min
。E.梯度丙酮脱水:每次
20 min
。F.渗透:
丙酮:SPI-PON812=3:1;丙酮:SPI-PON812=1:1;丙酮:SPI-PON812=1:3;纯SPI-PON812。每次12h。G.包埋及聚合:将纯树脂小心灌至包埋模具内
(每个孔
0.3 ml
),防止产生气泡,影响聚合。用牙签将组织样品小心挑出,置于包埋模 ...
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