尼古丁对人Vγ9Vδ2-T细胞抗肿瘤活性的影响
[目的]:研究尼古丁对人Vγ9Vδ2-T细胞杀伤肿瘤细胞活性的影响,并进一步研究其作用途径及分子机制。[方法]:通过密度梯度离心法获取健康志愿者外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMC);应用帕米磷酸盐(Pamidronate,PAM)联合人重组白介素2(Interleukin-2,IL-2)体外扩增Vγ9Vδ2-T细胞,并用流式细胞术检测其扩增前后免疫表型及细胞因子的表达量;使用流式细胞术检测经磁珠纯化后Vγ9Vδ2-T细胞的纯度;利用Western blot及免疫荧光法检测尼古丁受体α7-nAchR在Vγ9Vδ2-T细胞中的表达;Vγ9Vδ2-T细胞经梯度浓度尼古丁处理后,利用AnnexineV-PI法检测其凋亡水平;选取无吸烟史的健康志愿者的PBMC,在使用PAM联合IL-2特异性扩增Vγ9Vδ2-T细胞的同时,加入100μM尼古丁或PBS,每3天检测Vγ9Vδ2-T细胞在细胞培养物中的比率和细胞绝对数目,并于体外扩增14天后检测其免疫表型及细胞因子表达量的变化;其后将不同处理 ...