香石竹种质资源小滴玻璃化法超低温保存技术研究
香石竹(Dianthus caryophyllus L.)是闻名世界的四大切花之一,因其花形秀美,花色艳丽,而被广泛应用于花卉领域。超低温保存可以对香石竹种质资源进行长期保存,具有省时省力,不受自然环境及病虫害的影响,遗传稳定性高的优点,是今后种质资源保存的重要手段。
本文以香石竹品种’Master’为实验材料,利用正交设计和单因素方差分析优化了香石竹茎尖小滴玻璃化法超低温保存体系,并将该体系应用到三个香石竹品种’Calibra’、’Lamour’、(?)’Ofcar’中,最后对保存过程中细胞超微结构的变化进行了观察。主要研究结果如下：建立了香石竹品种’Master’茎尖小滴玻璃化法超低温保存体系。
具体保存方法为：取继代1.5-2个月的香石竹试管苗’Master’,剥取含2-4片叶原基的无菌茎尖(1-2mm)于室温下分别经含0.3M蔗糖的MS液体培养基预培养2d,5%DMSO+5%甘油预培养10min,2M甘油+0.4M蔗糖装载20min,0℃下用冰冻保护剂PVS2处理60min,冻存后的材料室温下迅速投入MS+1.2M蔗糖的卸载液中洗涤 ...