海洋链霉菌辅酶依赖型氧化还原酶（CHIE4）的体外重组表达及功能初步研究
高盐、高压、低温、低氧和寡营养等极端环境造就了海洋链霉菌独特的代谢方式,使其次级代谢产物丰富多样进而成为新型活性物质的重要来源。分离自青岛胶州湾的海洋链霉菌(Streptomyces griseoaurantiacus)菌株M045能够产生手霉素A、中尼霉素A和B等多种抗生素。
其中,中尼霉素A是由前体物质手霉素A经辅酶依赖型氧化还原酶CHIE4催化合成。研究表明中尼霉素可抑制黑色素瘤与乳腺癌的发生,并对农作物病原真菌具有抑制活性,因而具有较高的研究与应用价值。
本课题采用多种蛋白表达系统对来自海洋链霉菌菌株M045的CHIE4进行了体外重组表达研究。结果表明,由原核表达载体pET28表达的CHIE4会形成包涵体,通过透析和复性等处理能够获得可溶性的CHIE4,但是活性检测发现该CHIE4的催化活性基本丧失。
利用原核表达载体pMAL-p5x和pMAL-c5x可获得与麦芽糖结合蛋白标签融合表达的可溶性CHIE4。该融合蛋白经MBP亲和层析、TEV蛋白酶酶切和Ni柱串联亲和层析可得到纯化的单一CHIE4,活性检测实 ...