严重发热伴血小板减少综合征病毒糖蛋白Gn的免疫原性研究
目的：研究SFTSV糖蛋白Gn的体液和细胞免疫原性。方法：1.参考SFTSV HB29病毒株的糖蛋白Gn编码基因(GenBank:HM745931.1),优化编码Gn的密码子,氨基酸序列保持不变。
化学合成得到的野生型序列WSP-Gn经PCR反应分别在WSP-Gn的5’端和3’端引入HindⅢ和BamHⅠ酶切位点,在Gn的5’端和3’端引入NheⅠ和BamHⅠ酶切位点,然后将上述序列分别克隆到真核表达载体pJW4303,构建重组质粒pJW4303-WSP-Gn和pJW4303-tPA-Gn。化学合成得到的密码子优化型序列WSP-Gn-opt经PCR反应分别在Gn-opt的5’端和3’端引入NheⅠ和BamHⅠ酶切位点,克隆到pJW4303载体,构建重组质粒pJW4303-tPA-Gn-opt。
2.以上述重组质粒和空载体pJW4303分别转染HEK293T细胞,收集转染细胞上清和裂解液,Western blot检测糖蛋白Gn的表达。3.将上述重组质粒及空载体p.1W4303以肌肉注射、活体基因导入方式免疫BALB/c小鼠,免疫时间 ...