丙泊酚对体外培养发育期海马神经元的神经毒性作用及机制研究
第一部分原代大鼠海马神经元的培养、鉴定及形态学观察目的：通过对新生24h内SD乳鼠海马神经元的培养，掌握大鼠海马神经元体外培养方法；利用免疫荧光细胞化学方法鉴定神经元纯度；观察原代海马神经元形态学特点，测定细胞生长曲线。方法：取新生24h内的SD乳鼠，用75%乙醇消毒，断头，无菌条件下分层剪开皮肤和颅骨，暴露两侧大脑半球，弯镊取出大脑，置于预冷的DMEM液中，迅速分离出两侧海马组织，在解剖显微镜下去除血管和被膜，移入溶有木瓜酶的DMEM中，置于培养箱(37°C,5%CO2)中消化30min。
用玻璃吸管将组织块移入加有10%血清的DMEM液中终止消化两次，每次2min。然后将组织块移入加有血清的DMEM液中，用进口枪头轻轻吹打数次，静置后取上清液，如此重复2次。
取0.9ml按台盼蓝拒染法进行活细胞计数，制成密度为1×106/ml的细胞悬液,种植于基膜包被的24孔培养板中，每孔加150μl，置于37°C，5％CO2的培养箱内培养。4～6h后在倒置相差显微镜下观察神经细胞生长情况，全量换含有1%N2、2%B27的Neurobasa ...