丙泊酚及右美托咪定对体外培养海马神经元的影响及机制研究
第一部分原代乳鼠海马神经元的培养、形态学观察及纯度鉴定目的:1培养新生SD乳鼠海马神经元,掌握大鼠海马神经元的体外培养技术;2观察不同阶段的原代海马神经元的形态学特点;3利用免疫荧光细胞化学方法鉴定神经元纯度。方法:取新生24 h内的SD乳鼠,用碘酊和75%乙醇消毒,剪断头,分层剪开皮肤和颅骨,用弯镊取出大脑,置于预冷的DMEM液中,快速剥离出两侧海马组织,在解剖显微镜下去除海马的血管和被膜,把海马移入含有木瓜酶的DMEM中,置于37°C,5%CO2培养箱中消化30 min。
用吸管将组织块移入含有10%血清的DMEM液中终止消化2 min。然后把组织块移入含有血清的DMEM液中,用维纳斯剪剪碎,用枪头轻轻吹打三到五次,然后过200目细胞筛。
取0.9 ml按台盼蓝拒染法进行活细胞计数,制成1×106/ml密度的细胞悬液,种植于Matrigel基膜包被的24孔培养板中,每孔加500μl,置于37°C,5%CO2的培养箱内培养。6 h后全量换无血清Neurobasal培养基。
第48 h时加入终浓度为10μmol/L的阿糖胞苷,以抑 ...