转基因鉴定与安全性评估
(一)遗传标记法在表达载体中安装选择性基因如对某种抗生素的抗性基因,对某种除草剂的抗性基因等在表达载体中安装报告基因转化处理过的受体在相同条件下都能生长,但转化体具有非转化体所不具有的某种特殊表现(称为显性的报告基因),或者转化体不具有非转化体的表现(称为隐性的报告基因)。
1. 利用选择性基因
☆ 筛选植物转化细胞或转化植株常用的选择剂:抗生素类有卡那霉素、潮霉素B等;除草剂类有草甘膦、双丙氨膦、绿黄隆等。
检测潮霉素抗性的叶片放入含一定体积(约30 rn1)检测溶液的平皿中,在12 h光照/12 h黑暗、26℃条件下培养,定期观察叶片变色情况,以判断其抗性水平。检测溶液为含1 mg/L 苄氨基嘌呤(6-BA)及100mg/L潮霉素B的水溶液.
浸种培养至破胸时, 分放在装有不同浓度G418溶液的培养皿中, 培养皿底覆盖有两层滤纸。将培养皿置于光照培养箱内(光强为10,000 μmol/m2/s, 光照时间为12 h/d, 温度为29℃), 观察种子发芽情况, 7 d后统计其发芽率和白化死亡率。
每片叶剪成2 cm左右长的叶段放入装有G418的培养皿中, ...
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