RT-PCR
引物设计原则和方法
近刚开始做
PCR，参考了很多与引物设计相关的帖子，结合自己使用
primer5
和oligo
的体会，想谈谈自己设计引物的方法和步骤，恳请各位前辈指正。
RT-PCR
引物设计原则和方法
在NCBI
上搜索到该基因，找到该基因的
mRNA
，在CDS选项中，找到编码区所在位置，在下面的
origin
中，Copy
该编码序列作为软件查询序列的候选对象。
打开Primer Premier5
，点击File-New-DNA sequence,
出现输入序列窗口，
Copy
目的序列在输入框内（选择
As），此窗口内，序列也可以直接翻译成蛋白。点击
Primer
，进入引物窗口。
此窗口可以链接到
“引物搜索
”、“引物编辑
”以及“搜索结果
”选项，点击
Search
按钮，进入引物搜索框，选择
“PCR primers”
，“Pairs”
，设定搜索区域和引物长度和产物长度。在
Search Parameters
里面，可以设定相应参数。一般若无特殊需要，参数选择默认即可，但产物长度可以适当变化，因为
100～200bp
的产物电泳跑得较散，所以可以选 ...