出血性大肠杆菌O157 eae基因的克隆、表达及免疫学特性研究
本研究设计构建了以eae 基因编码的紧密素和志贺毒素B 亚基StxB 作为保护性抗原的融合蛋白和基因工程菌,并进行免疫学特性研究。首先,利用分子生物学技术克隆了出血性大肠杆菌eae 基因的C 端280 个氨基酸残基(Int280)基因部分与stx1/2B 构建了eae-stx1/2B 融合基因,通过原核表达,获得Eae-Stx1/2B 融合蛋白。
其次,运用PCR 技术扩增eae 全基因,构建了O157Δler/ stx(pBR322::stx1/2B::eae)基因工程菌并进行生物学特性分析。第三,进行上述融合蛋白和基因工程菌的免疫保护实验。
通过不同的免疫途径研究融合蛋白和基因工程菌株免疫接种动物抗体消长规律,从免疫后血清IgG抗体效价、粪便IgA 抗体效价、攻毒小鼠存活率、排菌数量和时间及体重变化等指标综合评价其对EHEC O157:H7 感染的保护作用。实验结果显示两个主要保护性抗原Eae 和StxB 共同构建的融合蛋白和基因工程菌对EHEC O157:H7 感染具有保护作用。
O157Δler/ stx(pBR3 ...